La tecnica Real Time offre la possibilità di analizzare la cinetica di reazione durante l'accumulo dei prodotti di amplificazione e stabilire, mediante un algoritmo, la quantità di DNA di partenza.
La curva di amplificazione che deriva da una PCR è solo teoricamente di tipo esponenziale; in realtà, dopo la prima fase esponenziale, in cui nessuno dei componenti della reazione è limitante, essa tende ad assumere un andamento di tipo lineare e raggiunge una fase di un plateau. La possibilità di seguire le reazioni in tempo reale permette di analizzarle nel momento in cui l'amplificazione è in fase esponenziale.
Tutto questo si può realizzare mediante l'impiego di sonde ad ibridazione, specifiche per il frammento amplificato del gene ricercato, marcate con molecole fluorescenti.
La quantificazione assoluta richiede standard di concentrazioni note ad alta precisione.
Tracciato Real Time
